丝状真菌分子细胞生物学与实验技术【2025|PDF|Epub|mobi|kindle电子书版本百度云盘下载】

丝状真菌分子细胞生物学与实验技术PDF格式电子书版下载

注意：本站所有压缩包均有解压码： 点击下载压缩包解压工具

第一章 丝状真菌基因型特征的鉴定1

1 概述1

2 基因组变异的主要特征1

3 确定研究目的2

4 用于基因组分析的技术3

5 假设8

6 选择最佳策略9

方案1 链格孢真菌的RAPD分析11

7 AFLP技术的原理及其应用13

方案2 丝状真菌的AFLP分析16

方案3 丝状真菌的cDNA-AFLP19

8 变性梯度凝胶电泳（DGGE）21

方案4 土壤中真菌的DGGE分析22

9 重要的数据库和互联网资源24

第二章 丝状真菌核酸的提取与分析26

1 概述26

2 基因组DNA的分离26

方案1 CTAB法提取真菌基因组DNA27

方案2 氯化苄（benzyl chloride）法提取真菌基因组DNA28

方案3 丝状真菌总DNA的分离29

方案4 固体平板上菌小量DNA的块速提取（以稻瘟病菌为例）31

方案5 真菌小量DNA的快速提取31

3 丝状真菌RNA的提取32

4 RNA的操作32

方案6 Trizol法提取丝状真菌总RNA33

方案7 丝状真菌总RNA的提取33

方案8 真菌总RNA的小量提取（Trizol法）34

第三章 丝状真菌的DNA转化35

1 概述35

2 选择性标记和转化载体35

3 待转化DNA的质量37

4 DNA的进入37

5 REMI转化38

方案1 稻瘟病菌（Magna porthe grisea）原生质体的制备及转化38

方案2 毛壳菌原生质体的制备39

6 真菌ATMT转化40

方案3 感受态农杆菌细胞的制备与转化40

方案4 利用农杆菌转化真菌41

7 电击转化42

方案5 Tapesia yallundae的电击转化42

8 转化DNA的命运42

方案6 丝状真菌中的质粒拯救43

方案7 农杆菌电击转化感受态的制备与转化45

第四章 丝状真菌的遗传分析48

1 子囊菌遗传分析48

方案1 对真菌孢子进行化学诱变49

方案2 对真菌的孢子进行紫外诱变50

方案3 营养缺陷型突变体的筛选与鉴定51

方案4 温度敏感型突变群体的制备51

方案5 单孢分离52

方案6 构巢曲霉的八分体分析53

方案7 通过准性重配确定里连锁群54

方案8 稻瘟病菌温度敏感型突变体的筛选55

2 担子菌遗传分析56

方案9 鬼伞菌在人工培养条件子实体和担孢子的产生58

方案10 通过CHEF凝胶电泳分离C.cinereus的染色体62

方案11 C.cinereus的四分体分离64

方案12 C.cinereus粉孢子的紫外诱变65

方案13 利用NTG（MNNG）/EMS对担子菌进行诱变66

方案14 平板印迹68

附：担子菌研究中的标准培养基69

第五章 丝状真菌的基因组分析70

1 概述70

2 遗传图谱70

方案1 克隆固定大小的基因组DNA作为RFLP探针71

方案2 RAPD操作要点71

3 电泳核型分析73

方案3 琼脂糖栓中制备完整染色体DNA73

方案4 琼脂糖栓电泳73

方案5 钳位均匀电场电泳74

4 物理图谱75

方案6 染色体DNA的RecA-AC75

方案7 准备BAC载体DNA78

方案8 准备BAC插入DNA78

方案9 BAC插入DNA大小的选择，恢复和克隆79

方案10 将文库克隆排列到杂交膜上80

方案11 收集克隆文库80

5 筛选文库81

方案12 Southern杂交分析混合文库和克隆阵列文库81

6 染色体步移（chromosome walking）82

方案13 BAC或者黏粒末端RNA探针的合成82

方案14 根据插入片段末端序列制备的探针83

7 真菌基因组分析相关数字资源85

第六章 真菌发育过程的细胞学分析86

1 概述86

2 丝状真菌生长的测定86

方案1 菌丝顶端生长的测定86

方案2 菌落生长速度的测定87

方案3 直线生长速率的测定87

3 丝状真菌孢子的萌发87

方案4 真菌孢子的萌发测定87

4 稻瘟病菌细胞生物学分析87

方案5 稻瘟病菌产孢培养、孢子收集和附着胞诱导培养88

方案6 稻瘟病菌侵染过程的组织病理学观察88

方案7 稻瘟病菌孢子、附着胞内脂质体、糖原的观察88

方案8 细胞自噬现象的观察89

方案9 酒精氧化酶活性测定89

方案10 冷冻替代用于电子显微镜观察90

方案11 细胞核，细胞壁和隔膜的染色90

第七章 丝状真菌的信号传导92

1 概述92

2 蛋白抽提93

方案1 构巢曲霉（Aspergillus nidulans）蛋白激酶的抽提93

3 蛋白免疫沉淀反应94

方案2 NIMA在大肠埃希菌（E.coli）中的表达和His-tag亲和纯化94

方案3 蛋白质免疫沉淀（IP）95

4 凝胶阻滞试验（gel-shift assay）检测蛋白的磷酸化状态95

方案4 NIMA磷酸化状态的凝胶阻滞试验96

5 蛋白激酶的底物特异性分析96

方案5 NIMA激酶分析97

第八章 丝状真菌的细胞生物学技术98

1 电子显微镜工作原理及其应用98

2 扫描电子显微镜样品制备的原理与方法99

3 透射电子显微镜样品制备的原理与方法101

4 电镜细胞化学技术104

5 免疫组化技术117

第九章 丝状真菌的生化研究方法120

1 概述120

2 抽提物的准备120

方案1 菌丝的摇瓶培养120

方案2 疏水蛋白的分离120

3 细胞组分的准备121

方案3 细胞膜的分离121

方案4 脉孢霉的液泡分离122

方案5 线粒体的分离123

方案6 细胞核的分离123

方案7 细胞核的抽提124

方案8 微体的分离125

4 蛋白分析125

方案9 孢子和菌丝的小量的蛋白质抽提125

方案10 从固体培养物中分离胞外酶（N.crassa的脂肪酶）126

方案11 从新鲜菌丝分离细胞内蛋白，适用于蛋白水解敏感蛋白的方法126

方案12 从新鲜菌丝分离细胞内蛋白127

方案13 从冻干菌丝分离胞内蛋白128

方案14 酶学分析的代谢物抽提128

第十章 真菌研究中的免疫学方法129

1 概述129

2 免疫原分子的特性129

方案1 免疫抗原的准备131

3 制备多克隆抗血清132

方案2 用辛酸和硫酸铵沉淀法纯化抗体133

方案3 用ELISA测定pAb的滴度和检验上清液中的mAb134

4 制备单克隆抗体135

方案4 通过B细胞-骨髓瘤细胞融合制取鼠科杂种瘤细胞136

方案5 荧光免疫检测138

方案6 限制性稀释法亚克隆139

方案7 冷冻法长期储存的杂交瘤细胞140

方案8 应用抗原介导ELISA鉴定Ig类别／亚类141

5 蛋白质和糖类抗原决定簇的特性142

方案9 通过化学和酶学修饰确定的抗原决定簇的特性143

6 其他经常使用的免疫学分析方法144

方案10 间接DAS-ELISA144

7 抗体的提供及其商业发展145

第十一章 丝状真菌的功能基因组分析146

1 构建稻瘟病菌突变子库146

2 目标突变技术146

3 cDNA文库构建及测序分析147

方案1 构建附着胞cDNA文库的cDNA的合成147

4 cDNA文库构建及筛选152

方案2 cDNA文库构建152

方案3 质粒pTriplEx2的插入片段的验证155

5 抑制差减杂交技术156

方案4 稻瘟病菌附着胞SSH差减文库的构建158

6 丝状真菌细胞自噬及其研究方法165

方案5 稻瘟病菌中细胞自噬研究方法171

方案6 稻瘟病菌细胞自噬研究中的其他相关显微观察172

方案7 双分子荧光互补技术174

方案8 蛋白质电泳（Tricine-SDS-PAGE）及蛋白质印迹杂交176

方案9 酵母双杂交系统研究蛋白互作180

方案10 细胞表达目的蛋白184

7 真菌中结合PCR（Double-Joint PCR）基因融合片段操作186

8 真菌RNAi技术的应用190

第十二章 丝状真菌分子进化与系统发育分析205

1 概述205

2 系统发育分析方法206

方案1 木霉菌的ITS rDNA的PCR扩增206

方案2 木霉菌的tef 1-α基因的PCR扩增207

方案3 木霉菌进行RAPD研究208

方案4 AFLP技术209

3 构建系统发育树209

第十三章 丝状真菌群体遗传分析211

1 纯培养条件下真菌群体遗传分析211

方案1 Pot2-rep-PCR211

方案2 MGR586-RFLP212

2 免培养技术用于环境中真菌群体的遗传结构分析212

方案3 土壤真菌DNA的直接提取215

方案4 土壤样品中真菌总DNA的提取215

第十四章 真菌分子生物信息学常用软件的使用217

1 概述217

2 文件格式217

3 FASTA格式219

4 Tab（或其他分隔符）分隔的行文件219

5 BLAST222

6 Primer Premier 5226

7 e-PCR231

8 Clustal235

9 BioEdit237

10 Staden Package239

参考文献249